Salud Mil 2018; 37(2):10-26
ARTÍCULOS ORIGINALES
fueron optimizadas en orden, para estandarizar el
procedimiento. Se evaluaron las purezas radioquí-
micas por HPLC. Tanto los coecientes de partición
(Log P) y la estabilidad in vitro fueron determinadas a
modo de obtener un agente de imagen estable y de
alta pureza radioquímica. Se realizaron estudios bio-
lógicos in vitro de anidad en distintas líneas celulares
humanas de mama y próstata (MDA-MB-231, MCF-7
y MDA-MB-435) y próstata (PC3, LnCap y Du-145),
así como su perl de biodistribución en modelos muri-
nos; a modo de obtener una aproximación al compor-
tamiento biológico del nuevo radiotrazador.
Logramos marcar el conjugado HYNIC-GSG-LHRH
con 99m-Tecnecio, empleando altas actividades
especícas usando como co-ligandos tanto Tricina
como la mezcla Tricina/Ácido Nicotínico, obteniendo
altas purezas radioquímicas (> 95%), alta estabili-
dad in vitro y baja lipolicidad (Log P de -2,5 ± 0,05
y -2,82 ± 0,04, empleando Tricina y Tricina/Ácido
Nicotínico, respectivamente). El conjugado [99mTc]-
HYNIC-GSG-LHRH/Tricina-Ácido Nicotínico reveló
elevada anidad de unión especíca por los recep-
tores de la hormona liberadora de la hormona luteini-
zante expresados en las líneas celulares de mama y
próstata. Se observó que el complejo radiomarcado
presenta un perl de biodistribución óptimo para ser
empleado como potencial agente de imagen.
RESUMEN
La hormona liberadora de la hormona luteinizante es
un decapéptido producido por el hipotálamo y posee
un rol fundamental en la regulación del eje pituitario/
gonadal y en el ciclo ovárico. Es capaz de unirse a
receptores especícos sobre las células gonadales
para regular la síntesis y secreción de las hormonas
gonadotrócas, las hormonas luteinizante y folículo
estimulante. A su vez, se ha comprobado que recep-
tores especícos de la hormona liberadora de la hor-
mona luteinizante se encuentran sobreexpresados en
cáncer mama, próstata, ovárico, entre otros; lo cual
ha permitido su utilización, tanto de análogos como
agonistas, en terapia para estas neoplasias, principal-
mente en cáncer de próstata y mama. Por lo anterior,
nos planteamos desarrollar y optimizar la marcación
con el radionucléido emisor gamma, el 99m-Tecnecio,
del péptido LHRH, a modo de evaluar su potencial
empleo como agente de imagen molecular en onco-
logía. Para esto, el HYNIC-GSG-LHRH fue adquirido
comercialmente. La marcación con 99mTc fue realizada
a 50 ºC en presencia de diferentes co-ligandos inclu-
yendo Tricina, Ácido etilendiaminodiacético, Tricina/
Ácido etilendiaminodiacético y Tricina/Ácido Nicotíni-
co. Las condiciones de marcación (pH, concentración
de coligandos, concentración de agente reductor (clo-
ruro de estaño), temperatura y tiempo de reacción)
Hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH):
potencial agente de oncología molecular
Luteinizing hormone-releasing hormone (LHRH):
potential agent of molecular oncology
Lucía Alfaya a, Ximena Camacho a, Mirel Cabrera a, María Fernanda García a,
Marcelo Fernández a, Juan Pablo Gambini b, Pablo Cabral a.
(a) Departamento de Radiofarmacia. Centro de Investigaciones Nucleares. Facultad de Ciencias. Universidad de
la República. Montevideo. Uruguay.
(b) Centro de Medicina Nuclear. Hospital de Clínicas. Facultad de Medicina. Universidad de la República.
Montevideo. Uruguay.
Recibido para evaluación: Febrero 2018
Aceptado para publicación: Setiembre 2018
Correspondencia:
Laboratorio de Radiofarmacia, Centro de Investigaciones Nucleares, Facultad de Ciencias, Universidad de la Re-
pública, Montevideo, Uruguay. Mataojo 2055, P.O. 11400, Montevideo, Uruguay. Tel.: (+5982) 5250901/108. Fax: (+5982) 5250895.
E-mail de contacto:
lalfaya.27@gmail.com
https://doi.org/10.35954/SM2018.37.2.2
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PALABRAS CLAVE: Hormona Luteinizante; Imagen
Molecular; Neoplasias de la Mama; Neoplasias de
la Próstata; Receptores de HL.
ABSTRACT
Luteinizing hormone-releasing hormone is a
decapeptide produced by the hypothalamus and
has a fundamental role in the regulation of the
pituitary/gonadal axis and in the ovarian cycle. It
is able to bind to specic receptors on gonadal
cells to regulate the synthesis and secretion of
gonadotrophic hormones, luteinizing hormones
and follicle stimulating hormones. In turn, it has
been shown that specic receptors of the hormone
releasing luteinizing hormone are overexpressed
in breast, prostate, ovarian cancer, among others;
which has allowed its use, both analogues and
agonists, in therapy for these neoplasms, mainly in
prostate and breast cancer. Therefore, we propose
to develop and optimize the gamma emitting
radionuclide labeling, 99m-Technetium, of the
LHRH peptide, in order to assess its potential use
as a molecular imaging agent in oncology. For this
purpose, the HYNIC-GSG-LHRH was purchased
commercially. The 99mTc labeling was performed at
50°C in the presence of di󰀨erent co-ligands including
Tricine, Ethylenediamine diacetic acid, Tricine/
Ethylenediamine diacetic acid and Tricine/Nicotinic
acid. The marking conditions (pH, concentration
of co-ligands, concentration of the reducing agent
(tin chloride), temperature and reaction time) were
optimized in order to standardize the procedure. The
radiochemical purities were evaluated by HPLC. Both
the partition coe󰀩cients (Log P) and in vitro stability
were determined in order to obtain a stable imaging
agent of high radiochemical purity. In vitro biological
a󰀩nity studies were performed in di󰀨erent human
breast and prostate cell lines (MDA-MB-231, MCF-
7 and MDA-MB-435) and prostate (PC3, LnCap and
Du-145), as well as their prole of biodistribution in
murine models; in order to obtain an approximation to
the biological behavior of the new radiotracer.
We managed to label the conjugate HYNIC-GSG-
LHRH with 99m-Tecnecio, using high specic activities
using as co-ligands both Tricine and the Tricine/
Nicotinic Acid mixture, obtaining high radiochemical
purities (> 95%), high stability in vitro and low
lipophilicity (Log P of -2,5 ± 0,05 and -2,82 ± 0,04,
using Tricine and Tricine/Nicotinic Acid, respectively).
The [99mTc] -HYNIC-GSG-LHRH/Tricine-Nicotinic Acid
conjugate revealed a high specic binding a󰀩nity for
the luteinizing hormone-releasing hormone receptors
expressed in the breast and prostate cell lines. It was
observed that the radiolabeled complex presents an
optimal biodistribution prole to be used as a potential
imaging agent.
KEY WORDS: Luteinizing Hormone; Molecular
Imaging; Breast Neoplasms; Prostatic Neoplasms;
Receptors, LH.
INTRODUCCIÓN
El cáncer se origina cuando las células en alguna
parte del cuerpo comienzan a crecer de manera
descontrolada.
Se estima que más de la tercera parte de los hu-
manos desarrollan cáncer en algún momento de
su vida; siendo este responsable del 10-25% de las
muertes en el mundo (1,2). Más de 200 variaciones
de esta patología han sido descritas hasta la fecha,
cada una con características y tratamientos distintos.
Según datos de la Comisión Honoraria de Lucha
Contra el Cáncer los tumores malignos constituyen
la segunda causa de muerte en nuestro país. Entre
éstos, el cáncer de mama es el más frecuente en
la mujer (gura 1); se estima que una de cada diez
mujeres podrá desarrollar cáncer de mama, causan-
do la muerte de aproximadamente dos mujeres por
día (3). En cuanto a los hombres, vemos que a nivel
local, es el cáncer de próstata que se posiciona en
primer lugar (gura 1) en cuanto a su incidencia y se-
gundo en cuanto a mortalidad (a nivel mundial es el
segundo luego del cáncer de pulmón). Se estima que
1,1 millones de hombres fueron diagnosticados con
cáncer de próstata en el 2012, siendo un 15% de los
cánceres diagnosticados en hombres, de los cuales
el 70% se encuentran en países desarrollados (4,5).
Hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH): potencial agente de oncología molecular
12
Publicación de la D.N.S.FF.AA.
La detección temprana, el diagnóstico y el tratamien-
to precoz son la clave para reducir la tasa de morta-
lidad. En este sentido, el campo de la imagenología
molecular se abre como una herramienta capaz de
generar imágenes funcionales, detectando y deter-
minando a nivel celular y molecular las característi-
cas de esta enfermedad (6,7).
Para esto, es necesario descubrir y explotar aquellos
marcadores celulares que se expresan únicamente
-o se sobreexpresan- en las células neoplásicas, de
forma tal de emplearlos como blanco para generar
nuestro agente de imagen.
Desde este punto, la utilización de anticuerpos mono-
clonales, fragmentos de anticuerpos, péptidos e inclu-
so fragmentos de ADN han demostrado ser buenos
vehículos para estas construcciones, pudiendo ser
fácilmente acopladas a un radionucleido especíco y
siendo entonces capaces de dirigir esta molécula in-
dicadora al sitio deseado por una reacción especíca
de unión a un receptor. Centrándonos en péptidos;
estos poseen propiedades farmacocinéticas únicas
al compararse con anticuerpos o fragmentos de
estos, presentando una mejor penetración y menor
captación inespecíca, a la vez que no provocan una
respuesta inmune; simultáneamente mantienen alta
especicidad y anidad por su blanco (8,9).
Dentro de estas moléculas encontramos a la hormo-
na liberadora de la hormona luteinizante (LHRH); una
hormona decapeptídica, secretada por las neuronas
del núcleo Arcuato del hipotálamo. Es secretada a la
circulación portal pituitaria y juega un rol importante
en la biología de la reproducción, induciendo la bio-
síntesis y liberación de la hormona luteinizante (LH)
y la hormona folículo estimulante (FSH). Su secre-
ción es crucial para el control de la función gonadal y
el ciclo ovárico normal. La continua estimulación pi-
tuitaria, tanto por la LHRH natural como por agonis-
tas, causa la desensibilización de los gonadotrofos
pituitarios, resultando en la cesación de la secreción
de gonadotronas (10,11).
Receptores especícos de la LHRH fueron original-
mente detectados en órganos regulados por el eje
pituitario-gonadal (glándula pituitaria, a la vez que en
tejido reproductor masculino y femenino) (12). Exis-
ten dos formas de receptores de LHRH, LHRHR-1
y LHRHR-2, los cuales a su vez se encuentran so-
breexpresados en diferentes tipos de cánceres, es-
pecialmente aquellos hormono dependientes, como
mama, endometrial, próstata y ovárico (13-16). Esto
demuestra que la LHRH podría estar involucrada en
el crecimiento de estos tumores, proporcionando así
las bases para las aplicaciones clínicas de análogos
Figura 1. Porcentaje de incidencia y mortalidad de cáncer en mujeres (izquierda) y hombres (derecha) en
Uruguay. Datos de la Comisión Honoraria de Lucha Contra el Cáncer (5).
Tasa ajustada por edad a la población mundial estándar expresada en casos x 100000.
CANCER EN URUGUAY 2010-2014
PRINCIPALES SITIOS (ordenados por Incidencia)
Salud Mil 2018; 37(2):10-26 13
de la LHRH en ginecología y oncología.
Últimamente, también se ha observado que exis-
ten sitios de unión para el péptido LHRH distintos
tumores humanos y en líneas celulares de cáncer
de hígado, laringe, páncreas, colon, riñón, piel y ce-
rebro (12-23), pudiendo entonces ampliar su uso a
otras patologías.
Por lo anterior, el péptido LHRH, de fácil síntesis quí-
mica, ya ha sido utilizado como posible terapia en
cáncer de próstata y mama, tanto como agonista o
antagonista (24,25).
Teniendo en cuenta esta base, nos planteamos
como línea lógica a seguir, la generación de un
nuevo agente de imagen preclínico para cáncer de
mama y próstata utilizando como base el péptido
LHRH marcado 99mTc vía el agente quelante bifun-
cional HYNIC (26,27).
Hay que tomar en cuenta que el radionucléido 99mTc
se encuentra ampliamente disponible en centros de
Medicina Nuclear, posee una química bien estableci-
da y adecuadas propiedades nucleares ([t ½ = 6,04
h, Eγ = 140 KeV (89%)]; lo que junto a su bajo costo
lo hacen un radionucleido indicado para la síntesis
de este tipo de agentes de imagen. La química del
marcado, con 99mTc de forma directa o a través de
agentes quelantes bifuncionales está bien estable-
cida (28,29) y ha sido de amplio uso en nuestro de-
partamento, donde disponemos de una plataforma
ya establecida para la generación de este tipo de
agentes de imagen (30-34).
MATERIALES Y MÉTODOS
1. Síntesis de péptido HYNIC-LHRH-GSG
El decapéptido HYNIC-GSG-LHRH (C55H75N17O13)
fue adquirido en su forma ya derivatizada con el
agente quelante bifuncional Succidinimyl-hidrazinoni-
cotinamida (HYNIC) (agente quelante sintetizado en
nuestro laboratorio por la Dra. María Fernanda García
(34) y entregado a la empresa para su derivatización),
con una pureza > 95% (determinada por HPLC-UV),
un peso molecular (PM) de 1589,71 g/mol (determina-
do por espectrometría masas dónde el PM del LHRH
sin HYNIC fue de 1454,6 g/mol) y en forma liolizada
(4 mg); de la empresa SIQUIMIA S.A. (Uruguay).
Se sabe que los motivos pGlu1-His2-Trp3 y Arg8-
Pro9-Gly10-NH2 del decapéptido son esenciales
para la unión a su receptor. A su vez, está documen-
tado que el reemplazo de la Gly6 con un D-aminoá-
cido (síntesis análogos u agonistas) es capaz de au-
mentar la anidad de unión, disminuir el clearance
e incrementar la ecacia terapéutica. Por lo cual, la
unión del agente quelante HYNIC empleando una
D-Lys y un linker exible (secuencia GSG) en la po-
sición 6, no alteraran la unión especíca con el re-
ceptor (C72H100N24O18) (gura 2).
2. Marcación del péptido con 99mTc
Se estudiaron distintas condiciones de marcación
del HYNIC-GSG-LHRH con 99mTc empleando como
co-ligandos los compuestos Tricina, ácido etileno-
diamina-N-N’-diacético (EDDA), Tricina-EDDA y
Tricina-Ácido Nicotínico (AN), y cloruro de estaño
(SnCl2) como agente reductor. Todos los solventes
empleados fueron previamente purgados con co-
rriente de gas N2.
Las purezas radioquímica (PRQ) de todos los com-
plejos fueron analizados mediante el empleo de un
equipo Agilent Serie Innity 1200, equipado con un
detector GABI Star y utilizando una columna de fase
reversa C18 (250 mm x 4,6 x 10 µm, Restek Ultra), el
Figura 2. Esquema del decapéptido HYNIC-GSG-
LHRH sintetizado por la empresa Siquimia S.A.
(Uruguay); C72H100N24O18; 1589,71 g/mol.
Hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH): potencial agente de oncología molecular
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Publicación de la D.N.S.FF.AA.
detector UV se estableció en 280 nm. El método utili-
zado para la determinación de la PRQ fue el siguien-
te: gradiente de 20 min utilizando como fase móvil
Agua/TFA 0,1% (A) y ACN/TFA 0,1% (B), 0-5 min
0-45% B, 5-10 min 45-65% B, 10-20 min 100% B.
Para llevar a cabo las respectivas marcaciones se
utilizó 20 µg de HYNIC-GSG-LHRH (1 µg/µL) alma-
cenado a -20 °C; al cual se le adicionaron:
• 150 µL de una solución de Tricina (100 mg/mL en
H2O destilada); 15 µL de una solución recién prepa-
rada de SnCl2 (1 mg/mL en 0,1 M HCl) y 185-555
MBq de 99mTcO4
- (hasta 500 µL). Se controla el pH
(4,5) y se incuba durante 30 min a 50 ºC en un baño
de agua.
• 150 µL de una solución de Tricina (100 mg/mL en
H2O) y 100 µL Ácido Nicotínico (AN; 20 mg/mL en
H2O destilada); 5 µL de una solución de SnCl2 re-
cién preparada (1 mg/mL en 0,1 M HCl) y 185-555
MBq de 99mTcO4
- (hasta 500 µL). Se controla el pH
(5) y se incuba durante 30 min a 50 ºC en un baño
de agua.
• 150 µL de una solución de Tricina (100 mg/mL
en H2O destilada) y 80 µL de EDDA (20 mg/mL en
H2O destilada); 15 µL de una solución de SnCl2
recién preparada (1 mg/mL en 0,1 M HCl) y 185-
555 MBq de 99mTcO4
- (hasta 500 µL). Se controla el
pH (5) y se incuba durante 30 min a 50 ºC en un
baño de agua.
Paralelamente, probamos realizando la incubación
durante 1 min a 70 °C en el mismo baño a modo de
comparar resultados.
• 100 µL de EDDA (40 mg/mL en H2O destilada);
15 µL de una solución de SnCl2 recién preparada
(1 mg/mL en 0,1 M HCl) y 185-555 MBq de 99mTcO4
-
(hasta 500 µL). Se controla el pH nal (5) y se incuba
durante 30 min a 50 ºC en un baño de agua.
3. Puricación de 99m Tc-HYNIC-GSG-LHRH
El control y puricación de los complejos peptídicos
marcados se realizaron mediante HPLC utilizando el
método que fue mencionado anteriormente. Poste-
riormente se diluyó la fracción puricada con aproxi-
madamente 500 µL de PBS 0,1 M pH 7,4 y el ACN
se redujo aplicando una corriente de N2. Finalmente,
se controla pH y si es necesario se añade PBS 0,1
M pH 7,4.
4. Coeciente de reparto o Log P
Para evaluar los valores de Log P, se puricaron por
HPLC los conjugados de HYNIC-GSG-LHRH/coli-
gando marcados con 99mTc. El disolvente fue elimina-
do y el conjugado marcado (0,74 MBq) fue reconsti-
tuido en PBS (pH 7,4, 0,1 M, 20 mL).
Tubos conteniendo 500 µL de Octanol y 500 µL del
conjugado marcado disuelto en PBS, fueron vigoro-
samente agitados durante 1 min y centrifugados a
14.000 rpm durante 10 min. Seis fracciones de 100
µL fueron colectadas de ambas fases, para la me-
dición de sus respectivas cuentas en un contador
de pozo de NaI. El coeciente de reparto se obtuvo
como el log (cuentas por min en octanol / cuentas
en fase acuosa).
5. Estabilidad in vitro
Estabilidad en PBS
Se estudió la estabilidad in vitro de los conjugados
99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/Tricina,99mTc-HYNIC-
GSG-LHRH/Tricina/AN,99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/
Tricina-EDDA y 99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/EDDA.
Para evaluar la estabilidad, se puricaron por HPLC
todos los conjugados 99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/co-
ligandos por el método previamente descripto. Se
incubó una alícuota de 1,85 MBq de cada complejo en
500 µL de PBS a 37 ºC hasta 4 hs. Cada experimento
fue realizado por triplicado y controlado por HPLC.
Estabilidad en Suero Fetal Bovino (SFB)
Se estudió la estabilidad in-vitro de los conjugados mar-
cados empleando los distintos co-ligandos incubando
una alícuota de cada complejo peptídico en SFB a 37º
C, hasta 4 hs. Las proteínas fueron precipitadas con
de Acetonitrilo (ACN) y centrifugadas (1750 g, 5 min,
4 ºC). Se midió la actividad del precipitado y del sobre-
nadante en un contador de pozo de NaI. Finalmente,
el sobrenadante fue analizado por RP-HPLC para eva-
luar la estabilidad de los complejos de 99mTc.
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Estabilidad en L-Cisteína
Se estudió la estabilidad in vitro del conjugado
99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/Tricina/AN en L-Cisteína
mediante el método previamente descripto por
Hnatowich et al. (35). Para ello fue incubada una
alícuota del complejo marcado disuelto en 500 µL
de PBS en distintas concentraciones de L-Cisteína
(0,1, 1,0 y 10 mM) a 37 ºC, hasta 24 hs. Todos los
estudios fueron realizados por triplicado y analizadas
sus respectivas PRQ por RP-HPLC, para evaluar la
estabilidad de los complejos de 99mTc.
6. Modelos celulares
Las líneas celulares humanas de cáncer de próstata
(PC3, LnCap, Du-145) y de cáncer de mama (MDA-
MB-231, MDA-MB-435 y MCF-7), fueron adquiridas
de American Type Culture Collection (ATCC). El
medio base utilizado en todas estas líneas celula-
res fue RPMI-1640 (Capricorn), suplementado con
Suero Fetal Bovino (SFB) a una concentración nal
de 10%, 2 mM de L-glutamina, 100 U/mL penicilina y
100 µg/mL streptomicina.
La línea celular de broblastos normales (NIH3T3)
también fue adquirida de ATCC, utilizando como me-
dio base DMEM alta glucosa (Capricorn), suplemen-
tada con Suero Fetal Bovino (SFB) a una concentra-
ción nal de 10%, 100 U/mL penicilina y 100 µg/mL
streptomicina y 100 µg/mL de HEPES.
Los cultivos fueron incubados a 37 °C con 5% de
CO2 y una atmósfera del 95% de humedad.
7. Estudios biológicos in vitro de unión celular
Se realizó un ensayo de anidad de unión especí-
ca en todas las líneas celulares mencionadas. Las
células fueron cultivadas en medio de cultivo duran-
te dos semanas. Se determinó el número de células
y se incubaron 106 células en 1,0 ml de medio de
cultivo con ~ 100 nM de 99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/
Tricina/AN por 15, 30, 45 y 60 min a 37 ºC.
La respectiva unión a la membrana fue determinada
mediante un lavado (300 uL) con acetato de sodio
(40 mM, pH 4,5) y la internalización fue determina-
da mediante un segundo lavado (300 uL) de NaOH
1N por 10 min. La cuanticación de las respectivas
cuentas por min (cpm) del péptido radiomarcado en
cada lavado fue determinado mediante el empleo de
un contador gamma automático (Capintec CRC-7,
Montvale, N.J., EE.UU.). Cada punto se realiza por
cuadruplicado.
Con el n de conrmar el grado de unión no espe-
cíca, se llevaron a cabo estudios blancos incu-
bando el mismo número de células y 99mTc-HYNIC-
GSG-LHRH/Tricina/AN con la adición de 20 μg de
HYNIC-GSG-LHRH sin marcar durante 2 hs. en las
mismas condiciones experimentales anteriormente
mencionadas.
8. Estudios de estabilidad biológicos in vivo
La evaluación biológica in vivo del complejo de
99mTc-HYNIC-LHRH/Tricina/AN se llevó a cabo me-
diante la realización de estudios de biodistribución.
Todos los procedimientos con animales fueron
aprobados por la Comisión Honoraria de Experi-
mentación Animal. Los ensayos fueron realizados
en ratones normales BALB/c, entre 6-10 semanas
de edad y 18-24 g.
Animales (n=5 por grupo) fueron inyectados por la
vena de la cola con aproximadamente 1-3 MBq del
complejo de 99mTc-HYNIC-LHRH/Tricina/AN puri-
cado y sacricados por dislocación cervical luego
de 0,5, 1, 2 y 24 hs. Los tejidos seleccionados (tu-
mor, corazón, hígado, pulmones, tiroides, riñones,
estómago, bazo, tracto gastointestinal y vejiga)
fueron extirpados, enjuagados de la sangre resi-
dual, pesados y sus respectivas radioactividades
medidas en un detector NaI (Tl). La sangre y orina
fueron también colectados y medidos. La radioac-
tividad en el tumor y en los tejidos normales es ex-
presada como porcentaje de dosis inyectada (% DI)
y como porcentaje de dosis inyectada por gramo de
tejido (% DI/g).
Los resultados se expresaron como media ± error
estándar. El análisis estadístico se realizó mediante
la prueba no apareada t. Fue considerado signica-
tivo un valor de p ≤ 0,05.
Hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH): potencial agente de oncología molecular
16
Publicación de la D.N.S.FF.AA.
RESULTADOS
1. Síntesis de HYNIC-GSG-LHRH
El peso molecular del decapéptido LHRH fue con-
rmado por espectrometría masas (MS) y por UV-
HPLC, proporcionados por la empresa SIQUIMIA
S.A., dónde la relación m/z del LHRH para (MH)+ fue
de 1454,6 Da y se muestra en las guras 3 y 4.
Al realizar el proceso de conjugación al AQB (HYNIC)
y al linker (GSG), el peso molecular del decapépti-
do conjugado HYNIC-GSG-LHRH fue conrmado
por espectrometría masas (MS Spectrum) y por UV-
HPLC, dónde la relación m/z del LHRH para (MH)+
fue de 1589,71 Da y se muestra en las guras 5 y 6.
2. Marcación con 99mTc de HYNIC-GSG-LHRH
Primariamente se evaluó por HPLC el perl del pépti-
do sin marcar mediante el empleo del detector UV en
las condiciones mencionadas anteriormente, revelan-
do un Tiempo de Retención (Tr = 7,00 min) (gura 7).
Posteriormente se evaluó por HPLC el perl del
99mTcO4
- en las condiciones ensayadas, revelando un
Tr de 3,63 min; de forma tal de establecer su posible
presencia en los distintos conjugados como impure-
za radioquímica (gura 8).
El conjugado HYNIC-GSG-LHRH se logro marcar
con rendimientos superiores a 99,52 ± 0,26% uti-
lizando Tricina como co-ligando a 50 °C durante
20 min. El complejo 99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/Trici-
na se logró puricar exitosamente a través de HPLC,
con un Tr de aproximadamente 7 min. (gura 9).
El conjugado HYNIC-GSG-LHRH se logro marcar
con rendimientos superiores a 99,83 ± 0,29% utili-
zando Tricina/AN como co-ligando a 50 °C durante
20 min. El complejo 99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/Trici-
na/AN se logró puricar por HPLC, presentando un
Tr de 6,99 min. (gura 10).
El conjugado HYNIC-GSG-LHRH se logro marcar con
rendimientos superiores a 74,98 ± 1,87% utilizando Tri-
cina/EDDA como co-ligando a 50 °C durante 20 min. El
complejo 99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/Tricina/EDDA se
puricó por HPLC, con un Tr de 7,07 min. (gura 11).
1.9E+4
Figura 3. Espectrometría de Masas (MS) de LHRH sin HYNIC (PM: 1454,6 g/mol), proporcionado por la empre-
sa Siquimia S.A.
Salud Mil 2018; 37(2):10-26 17
Figura 4. Cromatograma HPLC-UV de LHRH sin HYNIC proporcionado por la empresa Siquimia S.A.
Figura 5. Espectrometría de Masas (MS) de HYNIC-GSG-LHRH (PM:1589, 71 g/mol), proporcionado por la
empresa Siquimia S.A.
Por último, el conjugado HYNIC-GSG-LHRH se
marcó con rendimientos superiores a 70,94 ± 1,27%
utilizando EDDA como co-ligando a 50 °C duran-
te 20 min. El complejo 99m Tc-HYNIC-GSG-LHRH/
EDDA se puricó por HPLC, con un Tr de 7,03 min.
(gura 12).
Hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH): potencial agente de oncología molecular
18
Publicación de la D.N.S.FF.AA.
Figura 6. Cromatograma HPLC-UV de HYNIC-GSG-LHRH proporcionado por la empresa Siquimia S.A.
Figura 7. Perl RT-HPLC del péptido HYNIC-GSG-LHRH empleando detector UV a 280 nm. Tiempo reten-
ción (Tr): 7,00 min.
Figura 8. Perl de RT-HPLC de 99mTcO4
-. Tr: 3,63 min.
3. Coeciente de Reparto o log P
Se evaluó el carácter hidrofílico de los complejos
peptídicos marcados con 99mTc utilizando los distin-
tos co-ligandos, mediante el cálculo del coeciente
de reparto octanol-agua. Los valores obtenidos se
muestran en la gura 13. En todos los casos el com-
plejo estudiado mostró ser hidrofílico.
4. Estabilidad in vitro
Se estudió la estabilidad in vitro en PBS de los radio-
conjugados hasta 4 hs. (gura 14).
Todos los radiocomplejos resultaron estables, pero
sólo los complejos marcados con los co-ligandos
Tricina y Tricina/AN presentaron purezas radioquí-
micas mayores al 90% hasta las 4 hs. del estudio.
Salud Mil 2018; 37(2):10-26 19
5. Estabilidad en SFB
También la estabilidad de los radiocomplejos se
analizó en SFB hasta 4 hs. (gura 15). Se observo
que tanto el complejo marcado empleando el coli-
gando Tricina y la mezcla Tricina/AN son los com-
plejos que presentan una menor unión a proteínas
plasmáticas (siendo más estables a la transquela-
ción), aún a 4 hs. del estudio; en especial el com-
plejo marcado utilizando la mezcla de co-ligandos
Tricina/AN.
6. Estabilidad en L-Cisteína
Por último, la estabilidad de los radiocomplejos se
analizó mediante un estudio de transquelación en
Figura 9. Perl de RT-HPLC del 99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/Tricina en columna C18. Arriba detector UV,
Tr= 6,92 min y abajo detector gamma, Tr: 7,00 min.
Figura 10. Perl de RT-HPLC del 99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/Tricina/AN en columna C18. Arriba detector UV,
Tr = 6,99 min y abajo detector gamma, Tr= 7,00 min.
Figura 11. Perl de RT-HPLC del 99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/Tricina/EDDA en columna C18. Arriba detector UV,
Tr = 7,00 min y abajo detector gamma, Tr= 7,07 min.
Hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH): potencial agente de oncología molecular
20
Publicación de la D.N.S.FF.AA.
concentraciones diferentes de L-Cisteína (gura 16).
Se realizo únicamente con el complejo marcado con
Tricina/AN debido a que fue el que presentó mayor
estabilidad tanto en PBS como en SFB.
A una hora de incubación a 37 ºC con las distintas
concentraciones de L Cisteína, se observó que el
complejo marcado empleando la mezcla de co-li-
gandos Tricina/AN presentó la mayor estabilidad,
PRQ de 100,00 ± 0,50%, 100,00 ± 0,84% y 100,00
± 1,24% en 0,1 mM, 1,0 mM y 10,0 mM de L Cisteí-
na, respectivamente. A las 3 hs. de incubación, en
las mismas condiciones, se observó que el complejo
marcado permanece estable, observando PRQ de
100,00 ± 2,85%, 100,00 ± 2,30% y 100,00 ± 1,68%
en 0,1 mM, 1,0 mM y 10,0 mM de L Cisteína, respec-
tivamente. A 24 hs. de incubación se observó una
signicativa inestabilidad del complejo peptídico ra-
diomarcado, disminuyendo a 93,00 ± 2,30%, 85,00
± 1,65% y 76,00 ± 0,65% en 0,1 mM, 1,0 mM y 10,0
mM de L Cisteína, respectivamente.
Los datos de los estudios de estabilidad demostra-
ron que el complejo marcado empleando mezcla
de co-ligandos Tricina/AN presenta la mayor PRQ
Figura 12. Perl del detector gamma de RT-HPLC del 99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/EDDA en columna C18. Arriba
detector UV y abajo detector gamma, Tr= 7,03 min.
Figura 13. Estudio del coeciente de reparto (Log P) de 99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/co-ligandos.
Figura 14. Estudios de estabilidad in vitro en PBS
para los radioconjugados obtenidos. (% PRQ: % pu-
reza radioquímica).
Figura 15. Estudios de estabilidad in vitro en SFB
para los radioconjugados obtenidos.
Log P Tricina Tricina/AN Tricina/EDDA EDDA
-2.58 -2.82 -1.95 -1,16
Tiempo (horas)
%PRQ
0
1
2
4
0
50
100
150
99mTc-HYNIC-GSG/Tricina-LHRH
99mTc-HYNIC-GSG/Tricina/NA-LHRH
99mTc-HYNIC-GSG/Tricina/EDDA-LHRH
99mTc-HYNIC-GSG/EDDA-LHRH
Tiempo (horas)
%PRQ
0
1
2
4
0
50
100
150
99mTc-HYNIC-GSG/Tricina-LHRH
99mTc-HYNIC-GSG/Tricina/NA-LHRH
99mTc-HYNIC-GSG/Tricina/EDDA-LHRH
99mTc-HYNIC-GSG/EDDA-LHRH
Tiempo (horas)
%PRQ
0
1
2
4
0
50
100
150
99mTc-HYNIC-GSG/Tricina-LHRH
99mTc-HYNIC-GSG/Tricina/NA-LHRH
99mTc-HYNIC-GSG/Tricina/EDDA-LHRH
99mTc-HYNIC-GSG/EDDA-LHRH
Tiempo (horas)
% Unión Suero
1
2
4
0
20
40
60
80
100
99mTc-HYNIC-GSG/Tricina-LHRH
99mTc-HYNIC-GSG/Tricina/NA-LHRH
99mTc-HYNIC-GSG/Tricina/EDDA-LHRH
99mTc-HYNIC-GSG/EDDA-LHRH
Tiempo (horas)
% Unión Suero
1
2
4
0
20
40
60
80
100
99mTc-HYNIC-GSG/Tricina-LHRH
99mTc-HYNIC-GSG/Tricina/NA-LHRH
99mTc-HYNIC-GSG/Tricina/EDDA-LHRH
99mTc-HYNIC-GSG/EDDA-LHRH
Salud Mil 2018; 37(2):10-26 21
Figura 16. Estudios de estabilidad in vitro en L-Cis-
teína empleando la mezcla de coligandos Tricina/AN.
Figura 17: Porcentaje de Internalización (arriba) y
unión a membrana (abajo) del complejo 99mTcHY-
NIC-GSG-LHRH/Tricina/AN en las líneas NIH-
3T3, PC3, Du-145 y LnCap (próstata).
Tiempo (horas)
%PRQ
1
3
24
0
20
40
60
80
100
0.1 m M C isteína
1 m M Cisteína
10 m M C isteína
Tiempo (horas)
%PRQ
1
3
24
0
20
40
60
80
100
0.1 m M C isteína
1 m M C isteína
10 m M C isteína
Tiempo (minutos)
15
30
45
6 0
0
10
20
30
40
NIH-3T3
PC3
LnCap
Du-145
% Unión a membrana
Hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH): potencial agente de oncología molecular
y estabilidad. Es por lo anterior, que tanto los ensa-
yos biológicos in vitro como in vivo, para evaluar el
péptido radiomarcado fueron analizados empleando
dicha mezcla de co-ligandos.
7. Estudios biológicos in vitro de unión celular
Los estudios in vitro de unión y de bloqueo me-
diante la incubación de 99mTcHYNIC-GSG-LHRH/
Tricina/AN en las líneas PC3, Du-145, LnCap (cán-
cer de próstata humano) y MCF-7, MDA-MB-231 y
MDA-MB-435 (cáncer de mama humana) se reali-
zaron para evaluar la anidad de la unión especí-
ca del conjugado 99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/Tricina/
AN al LHRH-R.
En la línea empleada como control, la NIH-3T3, se
observó tanto una unión como internalización des-
preciable del complejo radiomarcado. Presentando
una unión de 0,46 ± 0,23%, 0,14 ± 0,02%, 0,15 ±
0,04%, 0,10 ± 0,016% a los 15, 30, 45 y 60 min. res-
pectivamente (guras 17 y 18, abajo); mientras que
una internalización de 0,16 ± 0,03%, 0,10 ± 0,01%,
0,11 ± 0,01%, 0,11 ± 0,02% a los mismos tiempos
ensayados (guras 17 y 18, arriba).
Los estudios de unión in vitro llevados a cabo en las
líneas celulares PC3, Du-145 y LnCap revelaron la
efectiva unión e internalización del complejo radio-
marcado. En la línea PC3, se observó una unión es-
pecíca de 10,65 ± 2,13%, 7,28 ± 2,3%, 5,56 ± 1,21%
y 3,77 ± 0,43% a los 15, 30, 45 y 60 min., respectiv-
Figura 18: Porcentaje de Internalización (arriba) y
unión a membrana (abajo) del complejo 99mTcHY-
NIC-GSG-LHRH/Tricina/AN en las líneas NIH-3T3,
MDA-MB-231, MCF-7 y MDA-MB-435 (mama).
22
Publicación de la D.N.S.FF.AA.
0,46% a los 15, 30, 45 y 60 min., respectivamente.
En la línea celular MDA-MB-231, la unión fue de
14,16 ± 1,48%, 14,79 ± 2,02%, 10,56 ± 1,59% y 13,74
± 0,96% a los 15, 30, 45 y 60 min., respectivamente;
mientras que presentó una internalización de 1,46 ±
0,61%, 1,06 ± 0,15%, 1,50 ± 0,17%, 1,72 ± 0,4% a
los 15, 30, 45 y 60 min., respectivamente.
Por último, en la línea celular MDA-MB-435, la unión
fue de 7,63 ± 0,56%, 6,06 ± 0,69%, 7,55 ± 0,40% y
4,12 ± 0,55%; mientras que presentó una internal-
ización de 0,55 ± 0,07%, 0,87 ± 0,05%, 0,95 ± 0,06%
y 0,48 ± 0,05% a los 15, 30, 45 y 60 min., respecti-
vamente.
Se observó que al emplear 20 µg de HYNIC-GSG-
LHRH sin marcar previamente a la adhisión del
complejo del péptido radiomarcado, presentó una
inhibición del 27,46% y 17,92% en la línea PC3,
a los 30 y 45 minutos respectivamente. La línea
LnCap presentó bloquos de 25,23% y 36,16%
en los dos tiempos evaluados (30 y 45 minutos
respectivamente), mientras que en la línea DU-
145 presentó una inhibición de la unión de 5,26%
y 13,9% en los dos tiempos evaluados (30 y 45
minutos respectivamente) (gura 19).
Por su parte, en la línea MDA-MB-231 se observó una
inhibicion del 51,45% y 38,00% en los dos tiempos
Figura 19: Porcentaje de unión a membrana y
bloqueo de célula NIH-3T3, PC3, LnCap y Du-145
(próstata).
Figura 20: Porcentaje de unión a membrana y
bloqueo de célula NIH-3T3, MDA-MB-231 y MCF-7
y MDA-MB-435 (mama).
Tiempo (minutos)
%Unión a membrana
30
45
0
10
20
30
40 NIH-3T3
NIH-3T3 Block
PC3
PC3 Block
LnCap
LnCap Block
Du-145
Du-145 Block
Tiempo (minutos)
%Unión a membrana
30
45
0
10
20
30
40
NIH-3T3
NIH-3T3 Block
PC3
PC3 Block
LnCap
LnCap Block
Du-145
Du-145 Block
Tiempo (minutos)
%Unión a membrana
30
45
0
10
20
30
40
NIH-3T3
NIH-3T3 Block
PC3
PC3 Block
LnCap
LnCap Block
Du-145
Du-145 Block
Tiempo (minutos)
%Unión a membrana
30
45
60
0
5
10
15
20
NIH-3T3
NIH-3T3 Block
MDA-MB-231
MDA-MB-231 Block
MCF-7
MCF-7 Block
MDA-MB-435
MDA-MB-435 Block
Tiempo (minutos)
%Unión a membrana
30
45
60
0
5
10
15
20
NIH-3T3
NIH-3T3 Block
MDA-MB-231
MDA-MB-231 Block
MCF-7
MCF-7 Block
MDA-MB-435
MDA-MB-435 Block
Tiempo (minutos)
%Unión a membrana
30
45
60
0
5
10
15
20
NIH-3T3
NIH-3T3 Block
MDA-MB-231
MDA-MB-231 Block
MCF-7
MCF-7 Block
MDA-MB-435
MDA-MB-435 Block
amente; mientras que la internalización fue de 1,93 ±
0,66%, 1,47 ± 0,12%, 1,45 ± 0,23% y 1,46 ± 0,46% a
los 15, 30, 45 y 60 min., respectivamente.
En la línea celular LnCap, la unión fue de 12,54 ±
1,51%, 19,95 ± 3,60%, 33,54 ± 0,51% y 10,27 ±
1,53% a los 15, 30, 45 y 60 min. respectivamente;
mientras que presentó una internalización de 2,47 ±
0,65%, 2,61 ± 0,03%, 2,80 ± 0,45% y 3,78 ± 1,12% a
los 15, 30, 45 y 60 min., respectivamente.
Por último, en la línea celular Du-145, la unión fue de
9,04 ± 1,29%, 11,73 ± 0,72%, 13,93 ± 1,84% y 7,06
± 1,10%; mientras que presentó una internalización
de 1,46 ± 0,61%, 1,06 ± 0,15%, 1,50 ± 0,17% y 1,72
± 0,41% a los 15, 30, 45 y 60 min., respectivamente.
Los estudios de unión in vitro llevados a cabo en
las líneas celulares MCF-7, MDA-MB-231 y MDA-
MB-435 revelaron la efectiva unión e internalización
del complejo radiomarcado.
En la línea MCF-7, se observó una unión especíca
de 3,88 ± 0,21%, 5,03 ± 0,72%, 15,21 ± 1,99% y 16,44
± 2,55% a los 15, 30, 45 y 60 min., respectivamente;
mientras que la internalización fue de 0,77 ± 0,17%,
1,26 ± 0,16%, 2,09 ± 0,46% y 1,20 ± 0,18% y 1,46 ±
Salud Mil 2018; 37(2):10-26 23
evaluados (30 y 45 minutos respectivamente); la
línea célular MCF-7 presentó una inhibicion del
80,61% y 88,46% en los dos tiempos evaluados (45
y 60 minutos respectivamente). Por útimo, la línea
MDA-MB-435 presentó una inhibicion del 33,91%
y 43,73% a los 45 y 60 minutos respectivamente
(gura 20).
Esto demuestra la especicidad de la unión del ra-
dioconjugado al LHRH-R en todas líneas celulares
de cáncer de próstata y mama humano ensayadas.
8. Estabilidad biológica in vivo: estudios de bio-
distribución
La evaluación biológica in vivo del complejo 99mTc-
HYNIC-GSG-LHRH/Tricina/AN se llevó a cabo
mediante la realización de estudios de biodistribución
en ratones Balb/C normales. Las biodistribuciones
fueron realizadas luego de 0,5, 1 y 2 hs. (n=4)
(guras 21 y 22). La eliminación de 99mTc-HYNIC-
LHRH/Tricina/AN fue muy rápida, observándose un
64,89 ± 3,54% Act, 73,38 ± 7,84% Act, 88,20 ± 2,01%
Act y 73,02 ± 7,52% Act en vejiga a 0,5, 1, 2 y 24 hs.,
respectivamente. A su vez se observó una retención
inespecíca en riñones e hígado. La captación en el
resto de órganos normales fue < de 2% Act/g.
DISCUSIÓN
Pudimos realizar un estudio preliminar del decapép-
tido LHRH como futuro agente diagnóstico en cán-
cer de mama y próstata, por medio de la modica-
ción empleando un linker GSG y la conjugación con
el agente bifuncional HYNIC, pudiendo marcar de
forma óptima con el radionucleido 99mTc.
Según el uso del coligando se lograron variadas acti-
vidades especícas, todas superiores al 70%. Como
evaluación pre-clínica, realizamos estudios in vitro de
estabilidad, unión a proteínas y lipolicidad a modo
de predecir la posible distribución en el organismo.
El estudio de pureza radioquímica de los cuatro con-
jugados y su subsiguiente puricación por HPLC per-
mitió detectar la presencia de los conjugados marca-
dos con 99mTc de forma eciente. En algunos casos
se observó la presencia de más de un pico, pudiendo
esto ser debido a la generación de diferentes isóme-
ros formados o formas de conjugación del HYNIC.
Las mayores purezas radioquímicas se lograron al
utilizar Tricina y Tricina/AN como co-ligandos; estos
también mostraron ser los más hidrofílicos (coecien-
te de reparto) y los que presentan mayor estabilidad,
tanto en PBS como en SFB 37 ºC hasta 4 horas. El
que mayor estabilidad presenta de estos dos es el
complejo que utiliza Tricina/AN, por lo cual evaluamos
la estabilidad de este hasta 24 hs. con distintas canti-
dades de L-Cisteína, logrando buenos resultados aún
a concentraciones de 10 mM de cisteína.
Debido a lo anterior el conjugado 99mTc HYNIC-GSG-
Figura 21: Estudio de biodistribución en ratones Balb/C
normales a 0,5, 1, 2 y 4 h p.i. de 99mTc-HYNIC-GSG-
LHRH/Tricina/AN. % Actividad (% Act) (n=4, % Act ± DS).
Figura 22: Estudio de biodistribución en ratones
Balb/C normales a 0,5, 1, 2 y 4 h p.i. de 99mTc-HYNIC-
GSG-LHRH/Tricina/AN. % Actividad/gramo (% Act/g)
(n=4, % Act/g ± DS). TGI: Tracto gastrointestinal.
Órganos
% Actividad
Sangre
Hígado
Corazón
Pulmón
Bazo
Riñones
Tiroides
Músculo
Hueso
Estómago
TGI
Vejiga
0
20
40
60
80
100 0.5 hs
1 hs
2 hs
24 hs
Órganos
% Actividad
Sangre
Hígado
Corazón
Pulmón
Bazo
Riñones
Tiroides
Músculo
Hueso
Estómago
TGI
Vejiga
0
20
40
60
80
100
0.5 hs
1 hs
2 hs
24 hs
Órganos
% Actividad
Sangre
Hígado
Corazón
Pulmón
Bazo
Riñones
Tiroides
Músculo
Hueso
Estómago
TGI
Vejiga
0
20
40
60
80
100
0.5 hs
1 hs
2 hs
24 hs
Órganos
% Actividad/gramo
Sangre
Hígado
Corazón
Pulmón
Bazo
Riñones
Tiroides
Músculo
Hueso
Estómago
TGI
Vejiga
0
50
100
150 0.5 hs
1 hs
2 hs
24 hs
Órganos
% Actividad/gramo
Sangre
Hígado
Corazón
Pulmón
Bazo
Riñones
Tiroides
Músculo
Hueso
Estómago
TGI
Vejiga
0
50
100
150
0.5 hs
1 hs
2 hs
24 hs
Hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH): potencial agente de oncología molecular
24
Publicación de la D.N.S.FF.AA.
LHRH/Tricina/AN fue el seleccionado para llevar a
cabo los estudios biológicos in vitro e in vivo.
Los estudios biológicos in vitro en las líneas celulares
de próstata y mama, así como en la línea NIH-3T3 de
broblastos normales (control negativo) se realizaron
para evaluar la anidad de unión del conjugado 99mT-
cHYNIC-GSG-LHRH/Tricina/AN al LHRH-R. Se ob-
servó que el complejo radiomarcado presentó una mo-
derada a elevada unión en todas las líneas evaluadas
(5-20%) en comparación con la línea control (< 0.5%).
Se observó a su vez una inhibición > 50% en la ma-
yoría de las líneas al emplear el péptido sin marcar, lo
que indica la especicidad de la unión del radioconju-
gado al LHRH-R expresado por las líneas celulares.
Por último se vericó la efectiva estabilidad observada
del conjugado 99mTcHYNIC-GSG-LHRH/Tricina/AN
mediante estudios de biodistribución en ratones
Balb/C normales, revelando un perl de biodistribución
muy adecuado para el desarrollo de un agente de
imagen diagnóstico, con elevada eliminación renal
y baja retención inespecíca a nivel renal (más del
60% las 0,5 hs. p.i.), la cual nos alentaría a realizar
futuras imágenes moleculares en modelos murinos
portadores de tumores de mama u próstata inducidos.
CONCLUSIONES
Mediante el presente estudio logramos llevar a cabo
la optimización de la marcación con 99mTc del con-
jugado HYNIC-GSG-LHRH de forma fácil, rápida y
sencilla. Se encontró que el complejo 99mTc-HYNIC-
GSG-LHRH/Tricina/AN presenta la > PRQ y estabili-
dad de todos los ensayos realizados, no requiriendo
una posterior puricación. 99mTc-HYNIC-GSG-LHRH/
Tricina/AN radiomarcado por este método reveló una
adecuada anidad de unión por su receptor en mo-
delos in vitro de cáncer de mama y próstata, como
también presentó un perl de eliminación ideal, re-
presentando de esta forma un prometedor agente
de imagen molecular para el diagnóstico de la ex-
presión del receptor de LHRH oncológico. A futuro
pretendemos realizar estudios imagenológicos en
modelos tumorales de cáncer de mama y próstata.
AGRADECIMIENTOS
Agradecemos a la Agencia Nacional de Investigación
e Innovación (ANII, Uruguay), a la Comisión Sectorial
de Investigación Cientíca (CSIC) y al programa PE-
DECIBA-Química. No existen conictos de intereses.
REFERENCIAS
(1) World Health Organization [base de datos en in-
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